技能部分
生物化学检验实验操作考试办法
一、考试项目(按生物化学实验指导方法选以下其中一项)
1、血清蛋白含量的测定(含分光光度法、电泳法及层析法)
2、血清胆固醇和甘油三酯的测定(异丙醇抽提法)
3、血糖定量(邻甲苯胺法)
二、实验要求(按生物化学实验指导方法,学生独立操作,90分钟内完成)
1、目的方法
2、仪器材料
3、结果结论
4、注意事项
三、操作技能
1、基本操作
玻璃仪器的洗涤
(1) 洗涤方法:A、一般洗涤剂
B、铬酸洗液
(2) 洗涤标准:A、内壁不挂水珠
B、外壁无字迹无标签
C、蒸馏水冲三遍
吸量管的选择和使用
(1) 奥氏吸管
(2)移液管
(3)刻度吸管
混匀法
(1) 旋转
(2)搅拌
(3)弹打
2、比色法-721分光光度计使用
(1) 波长的选择
(2)透光度"0"和"100"调定
(3)样品测定
(4)准确读取光密度
(5)仪器维护
3、电泳法-聚丙酰胺凝胶电泳
(1) 制胶
(2)上样
(3)电泳
(4)剥胶
(5)染色
(6)漂洗
4、层析法-微量离子交换法
(1) 装柱
(2)上样
(3)洗脱
(4)收集
(5)定量
5、离心法-普通离心机使用
(1) 严格平衡
(2)严格对称
(3)慢启慢停
(4)注意安全和离心异常声音
四、评分标准
1、基本操作10分
2、仪器使用10分
3、实验报告15分(含实验方法与结果)
其中实验结果按相对误差计分
测定值误差<=5%者为满分
测定值误差在>5%-15%者扣5分
测定值误差在>15%者扣8分
五、随机提问
教师对实验原理、现象、步骤及注意事项等随机进行提问
微生物学检验实验操作考试内容
微生物技能
一、考试项目
1.细菌涂片标本的制备
2.革兰氏染色法
3.显微镜油浸镜的使用方法
4.细菌分离培养技术(平板、斜面、液体)
二、实验操作要求
1.目的
2.材料
3.方法
4.注意事项
三、操作步骤的具体要求及评分点
⑴细菌涂片标本的制备
①载玻片的准备
②涂菌
③干燥
④固定
⑵革兰氏染色法
①结晶紫初染
②碘液媒染
③酒精脱色
④复染
⑶显微镜油浸镜的使用方法
①镜体垂直,不使载物台倾斜
②识别油镜头(一道蓝圈;100*;Del)
③取得最大亮度(集光器升到最高点,光圈开大,转动反光镜)
④观察物象(加油,调焦点)
⑤清洁保养(擦拭镜油,下降集光器,归位)
⑷细菌分离培养技术
①平板划线法(连续划线法、分段划线法)
②斜面培养基接种法
③液体培养基接种法
免疫学检验实验操作考试内容
一、考试项目
1.玻片凝集
2.试管凝集
3.间接凝集抑制试验
4.ELISA
二、实验操作要求
1.目的
2.材料
3.方法
4.注意事项
三、操作步骤的具体要求及评分点
⑴玻片凝集
①准备玻片分三格,于第一格和第二格各加一滴伤寒杆菌诊断血清,第三格加一滴生理盐水
②用灭菌接种环取伤寒杆菌培养物少许,涂于第三格内再涂于第一格内分别搅拌均匀成乳液状
③同法取痢疾杆菌培养物少许涂于涂于第二格内混匀
④轻摇玻片,经1-2分钟后观察结果
⑵试管凝集
①取小试管7支编号
②用5ml吸管吸取生理盐水于每管各加0.5ml
③用1ml吸管吸取溶血素0.5ml加入试管中反复吹吸三次使之与盐水混匀,吸出0.5ml注入第2管,以此类推稀释至第6管,自第6管吸出0.5ml弃去。第7管不加血清作对照。
④各管加绵羊红细胞0.5ml混匀,置37℃水浴中3小时后观察结果
⑶间接凝集抑制试验
①用毛细管滴加一滴被检材料于玻璃反应板的一个方格内,再滴加一滴生理盐水于另一个方格内作为对照
②各加一滴免疫血清,轻轻摇动,充分混匀
③再各加一滴致敏乳胶颗粒,缓缓摇动3-5分钟,在较强光线下观察结果
⑷ELISA
①包被聚乙烯塑料板,放4℃24小时
②弃掉包被液,用PBS洗涤3次,甩干后按图加入患者血清,阳性和阴性对照血清及PBS,放室温吸附1小时
③用PBS洗涤3次后甩干,加入酶标抗体,放37℃温箱45分钟
④用PBS洗涤3次后甩干,加入新配制底物邻苯二胺液,放37℃温箱15分钟
⑤显色后,加2M硫酸,每孔一滴中止反应,观察结果
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